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牛腺病毒3型(BAV-3)試劑盒(熒光-PCR法)
物品單位 價格 品牌
1380 上海滬崢
  • 產地:國內
  • 貨號:HXG548
  • 發布日期: 2021-02-26
  • 更新日期: 2022-06-07
產品詳細說明
產地 國內
品牌 上海滬崢
貨號 HXG548
用途范圍 僅限科研
純度 詳詢客服%
CAS編號
規格 50T/盒
是否進口

牛腺病毒3型(BAV-3)試劑盒(熒光-PCR法)為滬崢生物主要產品,滬崢生物堅守品質、銳意進取,滿足于每一位老師的實驗要求,廠家供貨,品質保證,價格優惠,歡迎來電咨詢!

規格:50T/盒

本試劑盒用牛腺病毒3型(BAV-3)特異性引物,結合一條特異性探針,用熒光PCR技術對牛腺病毒3型(BAV-3)進行體外擴增檢測,用于對可疑感染者的病原學診斷。

【儲存條件及有效期】


-20℃避光保存、運輸、避免反復凍融,有效期12個月。

【適用儀器】

ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他熒光定量PCR檢測儀。
【保存和運輸】

牛腺病毒3型(BAV-3)試劑盒(熒光-PCR法)樣品處理(樣本處理區)

1. 樣本前處理

組織樣品:每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g,手術剪剪碎混勻后 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續研磨,待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中,8000rpm 離心 2min,取上清液 100μL 1.5mL 滅菌離心管中

1.2 DNA 提取

1) DNA 的提取也可以采用 DNA 提取試劑盒(離心柱提取法),請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

2. 試劑配制(試劑準備區)

根據待檢測樣本總數,設所需要的 PCR 反應管管數為N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:

試劑

APP 反應液

酶液

用量(樣本數為 N)

20μL

1μL

將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中,21uL/管。

3. 加樣(樣本處理區)

將步驟 1 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL,分別加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4. PCR 擴增(核酸擴增區)

4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內;

4.2 設置好通道、樣品信息,反應體系設置為 25μL;

熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye) NONE,ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光,選擇 None 即可。

4.3 推薦循環參數設置:

步驟

循環數

溫度

時間

收集熒光信號

1

1 cycle

95℃

10min

2

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec

5. 結果分析判定

5.1 結果分析條件設定

設置 Baseline Threshold:一般直接按機器自動分析的結果分析,當曲線出現整體傾斜時,根據分析后圖像調節Baseline start (一般可在 3~15 范圍內調)、stop (一般可在 5~20 范圍內調節),以及 Threshold Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結果。

5.2 結果判斷

陽性:檢測通道 Ct 值≤35,且曲線有明顯的指數增長曲線;

可疑:檢測通道 35≤38,建議重復檢測,如果檢測通道仍為 35≤38, 且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;

陰性:樣本檢測結果 Ct 值>38 或無 Ct 值。

6. 質控標準

陰性質控品:Ct 值>38 或無 Ct 值;

陽性質控品:擴增曲線有明顯指數生長期,且 Ct 值≤32; 以上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。

7. 檢測方法的局限性

? 樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關;

? 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現假陽性結果;

? 陽性對照、擴增產物泄漏,會導致假陽性結果;

? 病原體在流行過程中基因突變、重組,會導致假陰性結果;

? 不同的提取方法存在提取效率差異,會導致假陰性結果;

? 試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現假陰性或定 量檢測不準確的結果;

? 本檢測結果僅供參考,如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

【注意事項】

? 所有操作嚴格按照說明書進行;

? 試劑盒內各種組分使用前應自然融化,完全混勻并短暫離心;

? 反應液應避光保存;

? 反應中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

? 使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服;

? 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行,以免交叉污染;

? 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

? 試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通 則》進行處理。




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